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  • 組培中污染產(chǎn)生的原因及防治措施發(fā)布時間:2010-05-11

      隨著生物技術(shù)的發(fā)展,組培生產(chǎn)技術(shù)在我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用速度很快,我國組培工業(yè)化生產(chǎn)始于20世紀(jì)70年代,近年來這項技術(shù)的應(yīng)用范圍十分廣泛,尤其在作物育種、苗木及花卉的脫毒和快繁等方面更具其他技術(shù)手段所無法比擬的優(yōu)勢。雖然組織培養(yǎng)技術(shù)操作并不難,但對一些技術(shù)環(huán)節(jié)的要求卻十分嚴(yán)格,稍有疏忽便會延誤實驗進程,甚至導(dǎo)致整個試驗失敗,為此我們必須重視在組織培養(yǎng)生產(chǎn)過程中污染帶來的危害。以下就組織培養(yǎng)過程中的污染來源及防止作一些探討。   一、在組織培養(yǎng)生產(chǎn)過程中污染的來源  。ㄒ唬┩庵搀w自身帶菌   許多植物都是栽培在室外,而空氣環(huán)境中有大量微生物存在,這些微生物可通過植物自然的孔口或傷口進入植物內(nèi)部,也有一些兼性腐生菌,可由外植體或通過相應(yīng)的侵入機制侵入植株內(nèi)部,如果在接種操作前對這些認(rèn)識不足,對外植體消毒不嚴(yán),就很容易發(fā)生污染現(xiàn)象。  。ǘ┡囵B(yǎng)基或接種工具滅菌不徹底   在對培養(yǎng)基滅菌過程中,如果滅菌時間過短、滅菌時溫度達不到要求、滅菌鍋壓力記數(shù)不準(zhǔn)等因素都有可能導(dǎo)致培養(yǎng)基滅菌不徹底,使一些病原微生物殘留在培養(yǎng)基中,一旦接種后就會造成污染。使用滅菌不徹底的接種工具,滅過菌的接種工具存放時間過長,都會導(dǎo)致在生產(chǎn)中造成污染,所以生產(chǎn)中要做好培養(yǎng)基和接種工具的滅菌和消毒工作。   (三)接種室消毒不嚴(yán)   在組培生產(chǎn)過程中,除了植物本身外,大部分污染來源便是來自接種操作室。因為在接種操作室中,未過濾的空氣中含有大量的微生物,這些微生物可隨著操作人員或植株接觸時而發(fā)生污染,所以接種室消毒不嚴(yán),也易引發(fā)污染發(fā)生。  。ㄋ模┤藛T因素   在整個操作室內(nèi),人員是較大的帶菌者,其不管在毛發(fā)或是衣服等,都隱藏著數(shù)不清的微生物。這些微生物的存在都可能造成一定的危害。為此在進入操作室前,接種人員的工作服、鞋帽都必須進行消毒處理,進入接種室必須換上消毒過的鞋帽,接種前,接種人員必須認(rèn)真洗手,還要用70%的乙醇棉球擦拭雙手,這樣在一定程度上可減輕污染的危害。  。ㄎ澹┏瑑艄ぷ髋_上的濾網(wǎng)過濾不徹底   超凈工作臺使用過久,或保養(yǎng)不當(dāng),而造成濾網(wǎng)壞掉或灰塵過多,導(dǎo)致在接種操作時對空氣過濾不徹底,也易產(chǎn)生污染。 (六)栽培過程污染   在栽培室,組培瓶外和外界氣體交換時,亦會有一些微生物進入。污染幾率取決于空氣中帶菌密度與組培瓶空氣交換率。   二、防止污染的方法   (一)認(rèn)真做好外植體的選擇和消毒工作,防止外植體帶菌   對外植體的選擇要考慮選擇的時間和部位,盡量選取帶菌少的材料,在時間上一般在植株的生長旺盛季節(jié)如春季和秋季病原微生物數(shù)量相對要少些,對于外植體的部位一般以幼嫩的部位較好。另外要做好外植體的消毒工作,目前外植體消毒常用藥劑有:70%~75%的乙醇溶液,0.3%~0.6%的次氯酸鈉溶液和0.1%的升汞溶液,選用何種消毒劑和消毒時間要根據(jù)外植體的幼嫩程度和部位確定,一般要求既將外植體表面的微生物殺死,又要求盡可能少傷害外植體組織和表層細胞。在生產(chǎn)實踐中防止外植體污染,也可實行多次滅菌和交替滅菌相結(jié)合的辦法,較終達到消滅雜菌的目的。   (二)改善接種室和培養(yǎng)室的環(huán)境條件,保證接種與培養(yǎng)環(huán)境清潔無菌   與外植體自身帶菌所產(chǎn)生的污染相比,操作污染和環(huán)境污染是可以克服的。在組培生產(chǎn)中,真菌的污染一般與環(huán)境有關(guān),細菌污染與接種材料及工具有關(guān)。生產(chǎn)中要通過定期做好對接種室與培養(yǎng)室消毒工作,減少環(huán)境中的微生物數(shù)量,減輕對污染的危害,為此,在接種前接種室要認(rèn)真做好消毒工作,且超凈工作臺在接種前,認(rèn)真擦洗,紫外燈要開20~30min左右。培養(yǎng)室的相對濕度應(yīng)控制在70%左右,對每件物品放到超凈工作臺上,都要用75%酒精認(rèn)真擦洗一遍,方可放到臺面上,只有這樣在一定程度上可控制污染程度。  。ㄈ┎僮魅藛T嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程   接種人員在接種操作中,應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范要求。接種人員的工作服、口罩、帽子等布質(zhì)品要定期進行濕熱滅菌,在超凈工作臺的操作區(qū)內(nèi),不要放入過多的待用物品,避免氣流被擋住產(chǎn)生污染。定期清洗或更換超凈工作臺過濾器,接種前15~20min打開風(fēng)機,風(fēng)速調(diào)整到20~30m/min,并對臺面用75%酒精噴霧消毒,工作人員進入操作室前必須對工作服、鞋帽進行消毒處理,進入接種室必須換上消毒過的鞋帽,接種前,接種人員必須認(rèn)真洗手,還要用70%的乙醇棉球擦拭雙手,只有接種過程中嚴(yán)格遵守操作要規(guī)范,才可避免因人為因素造成污染。  。ㄋ模┡囵B(yǎng)基及接種工器具要嚴(yán)格滅菌,確保滅菌質(zhì)量   在對培養(yǎng)基和接種工具滅菌時,要先檢查滅菌鍋的使用情況,發(fā)現(xiàn)問題要立即檢修。在滅菌過程中要絕對保證滅菌應(yīng)達到的壓力、時間,確保滅菌質(zhì)量。一般要求壓力應(yīng)達到0.1個大氣壓,時間維持在15~20分鐘,并且壓力表降到零后不能馬上出鍋,防止外界環(huán)境的冷空氣倒吸入已滅菌的培養(yǎng)瓶內(nèi)引起真菌污染,應(yīng)待鍋內(nèi)稍冷卻后再出鍋。對組培生產(chǎn)過程中培養(yǎng)容器封口采用塑料蓋、膠塞、棉塞、薄膜等材料,在使用前要認(rèn)真做好清冼和消毒工作,不符合要求堅決不用。在分裝培養(yǎng)基時,勿觸瓶口,防止培養(yǎng)基粘在瓶口上,引起污染,瓶口封好后要檢查封口是否破損,扎瓶口位置適當(dāng),松緊適宜。對已污染組培瓶要經(jīng)高壓滅菌后再清洗。   (五)在培養(yǎng)基中加入適量的抗生素   這是目前較常用的方法,抗生素可以直接加入到培養(yǎng)基中,也可以用抗生素噴灑或浸泡外植體。但植物種類不同,所用抗生素的種類、濃度和處理時間也不同,因此必須對不同植物采用不同的抗生素的種類、濃度和處理時間進行實驗探討。一般情況下,為消除革藍氏陽性菌對有些木本植物污染莖段組培苗,可在培養(yǎng)基中加入四環(huán)素、頭孢等混合物,可使細菌完全被消除。另外用頭孢菌素Ⅱ消除某些觀賞植物外植體中的內(nèi)生菌也有非常明顯的效果。  。├貌《驹谥仓牦w內(nèi)分布不均勻的原理,生產(chǎn)脫毒苗   主要是針對在植物內(nèi)部寄生的病毒,因病毒在生長點區(qū)域幾乎不存在,且病毒也難以長到頂芽的分生組織,所以切取頂芽的分生組織進行組織培養(yǎng),通過組織培養(yǎng)技術(shù)就可培養(yǎng)成無病毒植株,而且脫毒效果好,后代遺傳性穩(wěn)定,所以是目前生產(chǎn)無病毒苗較安全、較重要的一條途徑。  。ㄆ撸├门囵B(yǎng)基中高鹽或高糖的濃度,抑制微生物的生長   在培養(yǎng)基中有一些高鹽或高糖的濃度可抑制微生物生長,或單寧酸存在時也可以達到抑制微生物生長的效果。  。ò耍p少培養(yǎng)基中的某些有機成分,可抑制微生物的生長繁殖   培養(yǎng)基中有機物如VB1、VB6、煙酸等有機成分,是某些細菌生長的必需物質(zhì),除去這些有機物后,細菌無法生長發(fā)育,逐漸死亡減少。這樣也可在一定程度上減輕污染所帶來的危害。   總之,組培生產(chǎn)中污染的發(fā)生是不可忽視的環(huán)節(jié),在生產(chǎn)過程中思想上要高度重視,行動上要有嚴(yán)格遵守操作規(guī)范,才能在一定程度上減輕污染所帶來的危害。 [詳情]

  • 香菇采收后的加工發(fā)布時間:2011-08-17

    ◆此條信息真實性未經(jīng)本網(wǎng)站證實,請謹(jǐn)慎采用,風(fēng)險自負! 香菇采收后,必須及時組織加工,力爭當(dāng)天摘,當(dāng)天加工干燥,以免引起發(fā)黑變質(zhì)和腐爛。加工干燥的方法:。1)日曬干燥。香菇干燥以日曬較方便易行,且曬干的菇維生素D的含量較高。方法是:把采回的香菇及時攤放在當(dāng)陽的曬谷場或水泥地面上。曬時,先將菇蓋向上,菇柄朝下,一個個擺開,曬至半干后,菇柄向上,菇蓋朝下,直至九成干以上。如遇陰雨天,要補用火力烘干。。2)烘烤干燥。①先將得菇按大、中、小分三類,分別裝入烘盤。放菇時,菇蓋朝上,菇柄朝下,依次排列,不要零亂堆疊。烘烤時大菇盤裝在較上層,小菇盤裝在較下層。②燒火時,火力要先小后大,不可一下太猛。開始燒至30℃,以后每隔3小時至4小時,升溫5℃,較后維持在60℃,以免把菇烤熟焦。也不要低于55℃以免時間延長,導(dǎo)致香菇變黑變質(zhì)。③香菇烘烤至八成干時,便移出烤房,放到干燥的地方經(jīng)12個小時后,再復(fù)烤3小時到4小時,媽可達到干燥要求。這樣烤的香菇干燥一致,不易破碎,質(zhì)量好。烤一次需12-18小時。④烘烤用柴火、煤火、木炭都可以,但烤房內(nèi)一定要無煙,無火苗!×硗,應(yīng)注意:(1)采收、加工和貯藏時,較好分級進行,以利于按質(zhì)論價,優(yōu)質(zhì)優(yōu)價,提高經(jīng)濟效益。(2)香菇干燥后,較好用雙重塑料袋盛裝,裝時宜趁干燥時的余溫及時裝入,并做到密閉貯茂。(3)貯藏香菇,較好放在干燥的樓上,切忌放在濕處或地下室倉庫內(nèi)。堆疊不要太高太重,以免壓破壓碎菇體。(4)包裝后貯藏期間要經(jīng)常檢查,若水分超過13%,應(yīng)立即得復(fù)培。如發(fā)現(xiàn)蟲害,可用硫進行密閉薰蒸消毒治蟲。 (記者 不詳) [詳情]

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